ترجمه مقاله تکنیک های جدیدتر واکنش آنتی بادی آنتی ژن

تکنیک های جدیدتر واکنش آنتی بادی آنتی ژن

تکنیک های جدیدتر از یک مولکول آشکارساز جهت برچسپ گذاری آنتی بادی یا آنتی ژن استفاده می کند که این مولکول به نوبه خود آنتی ژن یا آنتی بادی مربوطه در نمونه را با ایجاد یک تاثیر قابل مشاهده تشخیص می دهد. اکثر تکنیک های جدیدتر از همین اصل استفاده می کنند، اما از نظر نوع مولکول برچسپ گذاری شده مورد استفاده و نوع تاثیر قابل مشاهده ایجاد شده با همدیگر تفاوت دارند.

نام اختصاری	روش سنجش ایمنی	مولکول مورد استفاده برای برچسپ گذاری	نوع تاثیر قابل مشاهده
ELISA	آنزیم متصل به ارزیابی ایمنوسوربنت	آنزیم	تغییر رنگ توسط طیف سنج تشخیص داده می شود.
IFA	ارزیابی ایمنوفلورسنس	رنگ فلورسنس	ساطع کردن نور، توسط میکروسکوپ فلورسنس تشخیص داده می شود.
RIA	آزمون سنجش رادیویی	ایزوتوپ رادیواکتیو	ساطع کردن تابش های بتا و گاما، توسط شمارنده های بتا و گاما تشخیص داده می شود.
CLIA	آزمون ایمنی متصل به شیمی لومینسنس	ترکیبات شیمی لومیسنس	ساطع کردن نور، توسط لومینومتر تشخیص داده می شود.
IHC	ایمنوهیستوشیمی	آنزیم	تغییر رنگ (با چشم مسلح) یا میکروسکوپ فلورسنس
WB	وسترن بلات	طلا یا نقره کلوئیدی	باند رنگی (با چشم مسلح)
تست سریع	تست ایمنو کروماتوگرافیک آزمون از طریق جریان	پروتئین A	باند رنگی (با چشم مسلح)
IEM	میکروسکوپ الکترونی ایمنوفریتین	مولکول های با تراکم الکترون (مانند فریتین)	به عنوان لکه سیاه زیر میکروسکوپ الکترونی ظاهر می شود.

 

ELISA (آزمون اﯾﻤﻨﻮﺳﻮرﺑﻨﺖ متصل به آنزیم)

ELISA به دلیل دو مولفه آن نامگذاری شده است.

• اﯾﻤﻨﻮﺳﻮرﺑﻨﺖ: یک ماده جاذب مورد استفاده (مانند پلی استایرن، پلی واینیل) که به طور ویژه آنتی ژن یا آنتی بادی موجود در خون را جذب می کند.
• آنزیم مورد استفاده به منظور برچسپ گذاری یکی از اجزای ارزیابی ایمنی (مانند آنتی ژن یا آنتی بادی) استفاده می شود. ELISA روش انتخابی در آزمایشگاه های بزرگ است، چون تعداد زیادی نمونه می تواند همراه با هم با استفاده از صفحات میکرولیتری مورد تست قرار گیرد. اما در آزمایشگاه های کوچک از این روش استفاده چندانی نمی شود:
• روشی مقرون به صرفه بوده و انجام آن 2 تا 3 ساعت طول می کشد (آزمون های سریع 10 تا 20 دقیقه طول می کشد).
• ELISA حساس ترین سنجش ایمنی است، بنابراین تست غربالگری در بانک های خون و مکان های با مراقبت پزشکی ترجیح داده می شود.
• اختصاصیت این روش پایین است. اما در حال حاضر با استفاده از نوترکیبی خالص تر و آنتی ژن های سنتزی و آنتی بادی های مونوکلونال، تکنیک ELISA خاص تر شده است.
• نیازمند تجهیزات گران قیمت مانند واشر ELISA است.

نوع ELISA	مورد استفاده برای تشخیص	آنتی ژن برچسپ گذاری شده با
ELISA مستقیم	آنتی ژن	آنتی بادی اولیه
ELISA غیرمستقیم	آنتی بادی یا آنتی ژن	آنتی بادی ثانویه
ELISA ساندویجی	آنتی ژن	آنتی بادی اولیه در ELISA مستقیم آنتی بادی اولیه در ELISA غیر مستقیم
ELISA رقابتی	آنتی ژن یا آنتی بادی	آنتی بادی ثانویه
ELISPOT	سلول های تولید کننده سایتوکاین	آنتی بادی اولیه

 

نکته: آنتی بادی اولیه در مقابل آنتی ژن هدایت می شود، آنتی بادی ثانویه یک Ig آنتی انسانی (برای گونه های دیگر) بوده که در ناحیه rc انسان یا هر گونه دیگری هدایت می شود.

آزمون ایمنوفلورسنس

تکنیک مشابه با ELISA بوده، اما از نظر برخی ویژگی های مهم با تکنیک ELISA تفاوت دارد.

• رنگ فلورسنت به جای آنزیم برای برچسپ گذاری استفاده می شود.
• تشخیص همه آنتی ژن ها و آنتی بادی های سطحی متصل به همه آنتی ژن های سطح سلول، برخلاف ELISA که تنها Ag یا Ab آزاد را تشخیص می دهد.

انواع آزمون های ایمنوفلورسنس

• آزمون مستقیم ایمنوفلورسنس: تشخیص سلول های حامل آنتی ژن های سطحی
• آزمون غیرمستقیم ایمنوفلورسنس: این تکنیک آنتی بادی های متصل به سطح سلول را تشخیص می دهد.
• جریان سیتومتری: این روش فناوری فلورسنس مبتنی بر لیزر بوده که 4 ویژگی را تشخیص می دهد:

• تعداد سلول یعنی تعداد سلول CD4 T
• تمایزیابی بین دو سلول یعنی سلول های CD4 T و CD8
• پراکندگی سلول ها:

• پراکندگی رو به جلو متناسب با اندازه سلول، سلول های بزرگتر دارای پراکندگی روبه جلو بیشتری هستند.
• پراکندگی جانبی متناسب با پیچیدگی داخل سلولی است: سلول های با گرانول های بیشتر (یعنی نوتروفیل ها) دارای پراکندگی جانبی بیشتری نسبت به سلول های با سیتوپلاسم ساده (لنفوسیت ها) هستند.
• مرتب سازی سلول های P73712 یک ترکیب

وسترن بلات

وسترن بلات پروتئین های خاص (آنتی بادی ها) در یک نمونه حاوی ترکیبی از آنتی بادی های هر آنتی ژن هدف متفاوت از آنتی ژن های همان میکروب را تشخیص می دهد.

• این نام به دلیل شباهت آن به بلات جنوبی (تشخیص قطعات DNA) و بلات شمالی (تشخیص mRNAs) به آن داده شده است.
• تست لکه شرقی آخرین مورد اضافه شده به لیست است، این روش اصلاح شده وسترن بلات بوده که اپی توپ های کربوهیدرات موجود بر روی پروتئین ها یا چربی ها را تشخیص می دهد.

وسترن بلات از سه جزء اساسی تشکیل شده است:

1. جداسازی ترکیب آنتی ژن پروتئین پیچیده به قطعاتی توسط SDS PAGE (الکتروفورز ژل سدیم دودسیل سولفات پلی اکریل آمید)
2. بلات NCM: قطعات آنتی ژن در ژل به سمت غشای نیتروسلولز انتقال می یابند.
3. ارزیابی ایمنی آنزیم: تشخیص آنتی بادی های خاص به طور جداگانه در خون بیماران حاوی ترکیبی از آنتی بادی ها.

تست سریع

آزمون های سریع انقلابی در تشخیص بیماری های عفونی ایجاد کردند:

• انجام این تست ها بسیار ساده (روش تک مرحله ای)، سریع (طی 10 تا 20 دقیقه انجام می شود)، نیازمند حداقل آموزش بوده و نیازی به هیچ گونه ابزارهای پیچیده ای ندارد.
• این تست ها آزمون های نقطه مراقبت (POC) نیز نامیده می شود، چون مستقل از تجهیزات آزمایشگاهی انجام شده و نتایج سریعا ارسال می شود.

دو اصل تست های سریع به شرح زیر است:

• ارزیابی جریان جانبی تست ایمنوکروماتوگرافیک (ICT): (i) نقطه یا طلای کلوئیدی برای برچسپ گذاری استفاده می شود، (ii) نمونه به صورت جانبی از طریق NCM جریان می یابد. به عنوان مثال تشخیص آنتی ژن در مالاریا.
• جریان از طریق آزمون: (i) پروتئین A برای برچسپ گذاری به جای طلا استفاده شده و (ii) نمونه به صورت عمودی از طریق NCM در مقایسه با جریان جانبی در ICT جریان می یابد. مثالی در این زمینه شامل تست HIV است.